Standaryzacja roślin leczniczych (wytyczne WHO)

1. Ocena botaniczna:

za. Ocena sensoryczna:

ja. Mikroskopia wizualna:

ii. Dotknąć.

iii. Zapach.

iv. Smak.

b. Ciało obce:

ja. Zagraniczne rośliny.

ii. Zagraniczne zwierzęta.

iii. Zagraniczne minerały itp.

do. Mikroskopia:

ja. Obserwacja histologiczna.

ii. Wykrywanie histochemiczne

iii. Pomiary.

2. Ocena fizykochemiczna:

za. Chromatografia cienkowarstwowa.

b. Materia wydobywcza

ja. Wartość ekstrakcyjna rozpuszczalna w gorącej wodzie.

ii. Zimna woda Substancja wydobywcza.

iii. Substancja ekstrahująca etanol

do. Zawartość wody i substancja lotna:

LOD, azeotropowy.

re. Lotne oleje:

Przez destylację z parą.

3. Ocena farmakologiczna:

za. Wartość goryczki:

Unit eq. na gorycz standardowego roztworu chlorowodorku chininy

b. Hemolityczna aktywność:

Na krew wół w porównaniu ze standardową saponiną odniesienia

do. Cierpliwość:

Frakcja (garbniki), która wiąże się ze standardowym pudrem do chowania.

re. Indeks puchnięcia:

W wodzie.

mi. Indeks piany:

Wysokość pianki wyprodukowanej przez 1 g materiału w określonych warunkach.

4. Ocena toksykologiczna:

za. Pozostałości pestycydów:

(i) Całkowity chlorek organiczny

(ii) Całkowity fosfor organiczny.

b. Arsen:

Szczep wytwarzany na papierze HgBr 2 w porównaniu ze standardowym zabrudzeniem.

do. Metale ciężkie:

Kadm i ołów

5. Zanieczyszczenie mikrobiologiczne:

za. Całkowita żywotna liczba tlenowa.

b. Patogeny:

Enterobacteriaceae, E. coli, Salmonella, P. aerogenosa i S. aureus

do. Aflatoksyny:

Według TLC, stosując standardową mieszaninę aflatoksyny (B 1, B 2, G 1, G 2 )

6. Skażenie radioaktywne.

Postacie makroskopowo:

Makroskopowa tożsamość leczniczych materiałów roślinnych opiera się na kształcie, wielkości, kolorze, cechach powierzchni, teksturze, charakterystyce pękania i wyglądzie powierzchni cięcia.

(i) Rozmiar:

Podziałka liniowa w milimetrach jest odpowiednia do pomiaru długości, szerokości i grubości surowych materiałów.

Małe nasiona i owoce można zmierzyć, wyrównując 10 z nich na arkuszu skalibrowanego papieru, z odstępem 1 mm między liniami i dzieląc wynik przez 10.

(ii) Kolor:

Zbadaj nietraktowaną próbkę pod rozproszonym światłem dziennym. Kolor próbki powinien być porównany z próbką referencyjną.

(iii) Charakterystyka powierzchniowa, tekstura i charakterystyka pękania:

Zbadaj nietraktowaną próbkę. W razie potrzeby można zastosować soczewkę powiększającą. W zależności od potrzeb może być konieczne zwilżanie wodą lub odczynnikami w celu zaobserwowania charakterystyki ciętej powierzchni.

Dotknij materiału, aby określić, czy jest on miękki, czy twardy; wyginaj i rozbijaj w celu uzyskania informacji na temat kruchości i wyglądu płaszczyzny pęknięcia - czy jest włóknisty, gładki, szorstki i ziarnisty itp.

(iv) Zapach:

Jeśli materiał ma być nieszkodliwy, umieść niewielką część próbki w dłoni lub zlewce o odpowiedniej wielkości i powoli i wielokrotnie wdychaj powietrze nad materiałem. Jeśli nie wyczujesz wyraźnego zapachu, zmiażdż próbkę między kciukiem a palcem wskazującym lub między dłońmi za pomocą delikatnego nacisku. Jeżeli materiał jest znany jako niebezpieczny, zmiażdżyć mechanicznie, a następnie wlać niewielką ilość wrzącej wody do pokruszonej próbki w zlewce.

Najpierw określ siłę zapachu (brak, słaby, wyraźny, silny), a następnie odczucie zapachu (aromatyczny, owocowy, stęchły, pleśniowy, zjełczały, itp.) Wskazane jest bezpośrednie porównanie zapachu z określoną substancją ( np. mięta pieprzowa powinna mieć zapach podobny do mentolu, goździk podobny do eugenolu).

(v) Smak:

Chirata:

Gorzki

Glycyrrhiza:

Słodkie

Cytrynowy:

Kwaśny.

Oznaczanie wody i substancji lotnych:

Nadmiar wody w leczniczych materiałach roślinnych będzie sprzyjał wzrostowi drobnoustrojów, obecności grzybów lub owadów i pogorszeniu po hydrolizie. Dlatego należy ustalić granice zawartości wody dla każdego materiału roślinnego. Jest to szczególnie ważne w przypadku materiałów, które pochłaniają wilgoć łatwo lub szybko ulegają zniszczeniu w obecności wody.

Następujące metody są używane jako:

1. Metoda azeotropowa:

Azeotropia daje bezpośredni pomiar wody obecnej w badanym materiale. Gdy próbka jest destylowana razem z nie mieszającym się rozpuszczalnikiem, takim jak toluen R lub ksylen R1, woda obecna w próbce jest absorbowana przez rozpuszczalnik. Woda i rozpuszczalnik są destylowane razem i rozdzielane w rurce odbiorczej podczas chłodzenia. Jeśli rozpuszczalnik jest bezwodny, woda może zostać w nim wchłonięta, co prowadzi do fałszywych wyników. Wskazane jest nasycenie rozpuszczalnika wodą przed użyciem.

2. Utrata suszenia:

Suszenie można prowadzić przez ogrzewanie do temperatury 100-105 ° C lub w eksykatorze nad pięciotlenkiem fosforu R pod ciśnieniem atmosferycznym lub zmniejszonym w temperaturze pokojowej przez określony czas. Metoda suszenia jest szczególnie przydatna w przypadku materiałów, które topią się w lepkiej masie w podwyższonej temperaturze.

Oznaczanie aktywności hemolitycznej:

Wiele roślinnych materiałów roślinnych, szczególnie te pochodzące z rodzin Araliaceae, Sapindaceae, Primulaceae i Dioscoreaceae zawierają saponiny. Najbardziej charakterystyczną cechą saponin jest ich zdolność do wywoływania hemolizy po dodaniu do zawiesiny krwi, saponiny powodują zmiany w błonie erytrocytów, powodując dyfuzję hemoglobiny do otaczającego ośrodka.

Hemolityczną aktywność materiałów roślinnych lub preparatu zawierającego saponiny określa się przez porównanie z materiałem odniesienia, saponiną R, która ma aktywność hemolityczną 1000 jednostek na gram. Zawiesinę erytrocytów miesza się z równymi objętościami seryjnego rozcieńczenia ekstraktu z materiału roślinnego. Najniższe stężenie mające wpływ na całkowite zahamowanie hemolizy określa się po pozostawieniu mieszanin do odstania przez określony czas. Podobny test przeprowadza się jednocześnie z saponiną.

Oznaczanie wskaźnika puchnięcia:

Wiele materiałów roślinnych ma szczególne właściwości terapeutyczne lub farmaceutyczne ze względu na ich właściwości pęcznienia, zwłaszcza gumy i te zawierające znaczną ilość śluzu, pektyny lub hemiceluloz.

Procedura:

Odważyć dokładnie 1 g materiału roślinnego do szklanego cylindra miarowego o pojemności 25 ml. Wewnętrzna średnica cylindra powinna wynosić około 16 mm, długość stopniowanej części około 125 mm, oznaczona w 0, 2 ml działach od 0 do 25 ml w kierunku ku górze.

Dodać 25 ml wody i dokładnie wstrząsać mieszaninę co 10 minut przez 1 godzinę. pozostawić na 3 godziny w temperaturze pokojowej. Zmierzyć objętość w ml zajmowaną przez materiał roślinny, w tym kleisty śluz. Oblicz średnią wartość indywidualnego oznaczenia.

Oznaczanie wskaźnika spieniania:

Materiały roślinne zawierają saponiny, które mogą powodować trwałą pianę, gdy wstrząsa się wodny roztwór.

Procedura:

Odważyć dokładnie 1 g gruboziarnistego proszku z materiału roślinnego i przenieść do kolby stożkowej o pojemności 500 ml zawierającej 100 ml wrzącej wody. Utrzymywać w umiarkowanym wrzenia przez 30 minut. Ochłodzić i przefiltrować do kolby pomiarowej o pojemności 100 ml i dodać do niej wystarczającą ilość wody, aby rozcieńczyć do objętości. Przelej wywar na 10 zakorkowanych probówek w kolejnych porcjach 1 ml, 2 ml, 3 ml, itd. Do 10 ml i wyreguluj objętość cieczy w każdej probówce wodą do 10 ml. zatkać rury i potrząsać nimi w ruchu wzdłużnym przez 15 sekund, dwa razy na sekundę.

Odstawić na 15 minut i zmierzyć wysokość piany. Jeżeli wysokość piany w każdej probówce jest mniejsza niż 1 cm, wskaźnik spieniania jest mniejszy niż 100. Jeżeli w dowolnej probówce mierzy się wysokość piany 1 cm, objętość materiału roślinnego wytrąca się w probówce (a) służy do określenia indeksu.

Jeśli ta rura jest pierwszą lub drugą rurą z serii, przygotować rozcieńczenie pośrednie w podobny sposób, aby uzyskać dokładniejszy wynik. Jeżeli wysokość piany jest większa niż 1 cm w każdej probówce, wskaźnik pienienia wynosi ponad 1000 w przypadku powtórzyć oznaczenie, stosując nową serię rozcieńczeń wywaru w celu uzyskania wyniku.

Wskaźnik spieniania = 1000 / a

Gdzie a = objętość w ml dekoktu użytego do przygotowania rozcieńczenia w probówce, gdzie obserwuje się pienienie do wysokości 1 cm.

Oznaczanie zanieczyszczeń mikrobiologicznych:

A. Badanie na obecność Salmonelli:

Weź 10 g sproszkowanego materiału i zwiększ objętość do 100 ml za pomocą bulionu laktozowego. Mieszaninę inkubuje się w temperaturze 35-37 ° C przez 4 godziny. Pobrano kolejne 10 ml tej próbki. Dodaje się 100 ml bulionu z zielonej żywicy z metylenem i żywicą żółciową i inkubuje w 37-40 ° C przez 24 godziny. Pobrano z niej 1 ml próbkę i posiano na pożywce agarowej z liofilą ksylozy z odczynnikiem lioksynowym.

Można również stosować agar cytrynianowy deoksykscholan lub jasnozielony agar. Inkubuje się go w temperaturze 35 ° C przez 50 godzin. Małe przezroczyste i bezbarwne z nieprzezroczystą, różową (otoczoną strefą różową do czerwonej) wskazują na obecność S. typhi.

Test biochemiczny: Kolonie uzyskane z powyższej hodowli traktuje się poliwartościowymi surowicami Salmonella. Jest to tzw. Serotypowanie lub test aglutynacji szkiełek. Pojawienie się zlepienia komórek potwierdza obecność gatunków salmonelli.

B. Test na E. coli:

Lek bada się na obecność E. coli, pobierając 10 gramów sproszkowanego materiału i zwiększając objętość do 100 ml za pomocą bulionu laktozowego.

Tę mieszaninę należy inkubować przez 4 godziny w temperaturze 35-37 ° C. Pobrano 1 ml próbki i wykonano seryjne rozcieńczenia za pomocą 9 ml bulionu MacConkey o stężeniu 100 mg / ml, 10 mg / ml, 0, 1 mg / ml i 0, 01 mg / ml. próbki te inkubuje się w 37 ° C przez 18 godzin. ml każdego inkubuje się na pożywce agarowej MacConkey, a następnie inkubuje się przez 24 godziny w 35-37 ° C wzrostu czerwonych ogólnie nie-śluzowych kolonii gram ujemnych prętów wskazujących na obecność E. coli.

C. Test na Staphylococcus aureus:

Weź 10 g proszku i uzupełnij objętość do 100 ml za pomocą bulionu NA. Tę mieszaninę inkubuje się w temperaturze 35-37 ° C przez 4 godziny. Jeden ml tej próbki wysiewano na pożywce agarowej Baird-Parker F i inkubowano w temperaturze 35-37 ° C przez 48 godzin. Czarne kolonie grama + ve cocci, otoczone jasnymi strefami wskazują na obecność Staphylococcus aureus.

Oznaczanie tanin:

Garbniki są substancjami zdolnymi do przekształcania skór zwierzęcych w skórę przez wiązanie białek w celu utworzenia nierozpuszczalnych w wodzie substancji, które są odporne na enzymy proteolityczne. Ten proces, gdy jest stosowany do żywej tkanki, jest znany jako działanie ściągające i jest powodem terapeutycznego stosowania garbników.

Metoda:

Odważyć dokładnie 10 g drobnego proszku roślinnego do kolby stożkowej. Dodać 150 ml wody i ogrzewać we wrzącej łaźni wodnej przez 30 minut. Ostudzić, przenieść mieszaninę do kolby pomiarowej o pojemności 250 ml i rozcieńczyć do objętości wodą. Pozwolić, aby stały materiał osadził się i przefiltrować ciecz przez bibułę filtracyjną o średnicy 12 cm, odrzucając pierwsze 50 ml filtratu.

Aby określić całkowitą ilość materiału dającego się ekstrahować w wodzie, odparować 50 ml ekstraktu z materiału roślinnego do sucha, osuszyć pozostałość w piecu w temperaturze 105 ° C przez 4 godziny i zważyć (T1).

Aby określić ilość materiału roślinnego niezwiązanego z ukrywaniem proszku i dobrze wstrząsać przez 60 minut. Przesączyć i odparować 50 ml klarownego przesączu do sucha. Pozostałość suszy się w piecu w temperaturze 105 ° C i waży (T2).

Aby określić rozpuszczalność pudru w skórze, weź 6 g proszku do pudru, dodaj 80 ml wody i dobrze wstrząsaj przez 60 minut. Przesączyć i odparować 50 ml klarownego przesączu do sucha. Pozostałość suszy się w piecu w temperaturze 105 ° C i waży (T0).

Oblicz ilość tanin w procentach, stosując następujący wzór:

[T1 - (T2 - T0)] x 500 / w

Gdzie w = masa materiału roślinnego w gms.

Oznaczanie pozostałości pestycydów:

1. Oznaczanie chlorków:

ja. Aparat:

Oznaczenie wykonuje się za pomocą spektrofotometru umożliwiającego pomiar absorbancji przy długości fali 460 nm za pomocą ogniw absorpcyjnych o długości ścieżki 2 cm i 10 cm

ii. Procedura:

Umieścić 15 ml roztworu otrzymanego po spaleniu w kolbie stożkowej o pojemności 50 ml wraz z 1 ml siarczanu żelazowo-amonowego (0, 25 mol / l) i 3 ml tiocyjanianu rtęci. Zawirować zawartość kolby i odstawić na 10 minut. Przenieść porcję roztworu do 2 cm komórki i zmierzyć absorbancję przy 460 nm za pomocą wody w celce odniesienia. Należy dokonać szybkiego odczytu w celu zminimalizowania absorpcji chlorków z powietrza.

Przygotuj standardowy roztwór chlorku sodu zawierający 5 g chlorku na ml. Przenieść podwielokrotności tego roztworu (0 ml, 2 ml, 4 ml, 6 ml, 8 ml i 10 ml) do serii kolb stożkowych o pojemności 50 ml i rozcieńczyć do 15 ml wodą. Opracuj kolor i zmierz absorbancję, jak opisano powyżej. Wykreślić absorbancję względem zawartości chlorków w rozcieńczeniach w ml i interpolować zawartość chlorków w roztworach badanego materiału.

2. Próba graniczna na arsen:

ja. Aparat:

Aparat składa się z butelki o pojemności 100 ml lub kolby stożkowej zamkniętej gumowym lub szklanym korkiem, przez który przechodzi szklana rurka. Dolna część rury jest przeciągnięta do wewnętrznej średnicy 1, 0 mm, a 15 mm od jej końcówki jest bocznym otworem o średnicy 2 do 3 mm.

Gdy rura znajduje się w ograniczniku, boczny otwór powinien znajdować się co najmniej 3 mm poniżej dolnej powierzchni korka. Górny koniec rury ma idealnie płaską powierzchnię prostopadłą do osi rury.

Drugą szklaną rurkę o tej samej średnicy wewnętrznej i długości 30 mm, o podobnej płaskiej powierzchni, umieszcza się w sprężynach kontaktowych lub zaciskach. Do dolnej rurki włożyć 50 do 60 mg bawełny ołowiowej, luźno upakowane lub mały wacik z bawełny i zwinięty kawałek ołowianego papieru o wadze od 50 do 60 mg. pomiędzy płaskimi powierzchniami rur umieść krążek lub mały kwadrat z papieru chlorku rtęci, wystarczająco duży, aby pokryć otwór rurki.

ii. Procedura:

Roztwór testowy wprowadza się do butelki lub kolby stożkowej; dodać 5 ml 1 M jodku potasu i 10 g cynku jako T. Natychmiast zmontować aparaturę i zanurzyć kolbę w łaźni wodnej w takiej temperaturze, aby utrzymać jednorodną ewolucję gazu.

Po 40 minutach jakiekolwiek plamy wytworzone na papierze chlorku rtęci nie są bardziej intensywne niż te otrzymane przez traktowanie w ten sam sposób 1, 0 ml standardowego roztworu arsenu (10 ppm jako) rozcieńczonego do 50 ml wodą.

3. Oznaczanie metali ciężkich:

ja. Standardowe rozwiązanie:

Do 50 ml butli Nessler'a pipetować 1, 0 ml wzorcowego roztworu ołowiu (20 ppm Pb) i rozcieńczyć wodą do objętości 25 ml. dopasować rozcieńczonym kwasem octowym lub rozcieńczonym roztworem amoniaku do pH pomiędzy 3, 0 a 4, 0, rozcieńczyć wodą do około 35 ml i wymieszać.

ii. Rozwiązanie testowe:

Do 50 ml butli Nesslera wlać 25 ml roztworu przygotowanego do testu zgodnie z indywidualną monografią lub rozpuścić określoną ilość badanej substancji w dostatecznej ilości wody, aby wytworzyć 25 ml. dopasować rozcieńczonym kwasem octowym lub rozcieńczonym roztworem amoniaku do pH pomiędzy 3 do 4, rozcieńczyć wodą do około 35 ml i wymieszać.

iii. Procedura:

Do każdego z butli zawierających roztwór wzorcowy i roztwór testowy dodać odpowiednio 10 ml świeżo przygotowanego roztworu siarkowodoru, wymieszać, rozcieńczyć wodą do 50 ml, pozostawić na 5 minut i skierować w dół na białą powierzchnię; kolor wytworzony za pomocą roztworu testowego nie jest bardziej intensywny niż kolor wytworzony przy użyciu roztworu wzorcowego.