Przydatne uwagi na temat enzymatycznej papainy i enzymatycznej pepsyny
Immunoglobuliny są białkami i generalnie są odporne na trawienie przez enzymy.
Jednakże enzym papaina i pepsyna rozszczepiają cząsteczki immunoglobulin. Fragmenty wytworzone przez papainę i pepsynę są przydatne do badań nad strukturą i funkcjami immunoglobulin. Ale miejsca cięcia tych dwóch enzymów są różne (rysunek 9.5).
Ryc. 9.5: Schemat proteolitycznej fragmentacji immunoglobuliny przez krótkie traktowanie enzymami papainy i pepsyny.
Papaina enzymatyczna rozszczepia immunoglobulinę na N-końcowej wiązce dwusiarczkowej łańcucha ciężkiego i wytwarza trzy fragmenty (dwa fragmenty Fab i jeden fragment Fc). Pepsyna enzymatyczna rozszczepia immunoglobulinę w regionie C-końcowym i wytwarza jeden duży fragment (który zawiera dwa obszary Fab) zwany F (ab ') 2 . Pozostałe ciężkie łańcuchy na stronie C-końcowej są trawione na wiele małych peptydów
1. Papaza enzymatyczna:
Papaina enzymatyczna rozszczepia region zawiasowy po stronie N-końcowej dwusiarczków łańcucha ciężkiego, co powoduje powstawanie trzech fragmentów. (Dwa fragmenty zawierające region zmienny i jeden fragment zawierający regiony C H 2 i C H 3). Dwa fragmenty zawierające region zmienny są nazywane; Fragmenty Fab (tj. Fragment wiążący antygen), ponieważ mają miejsca wiążące antygen.
Trzeci fragment obejmuje karboksylowe części obu ciężkich łańcuchów utrzymywane razem przez disulfidy. Generalnie struktura trzeciego fragmentu jest identyczna dla wielu różnych cząsteczek immunoglobulin.
W związku z tym fragmenty tego typu można krystalizować, nawet jeśli składają się z wielu różnych immunoglobulin. Ten fragment nazywa się fragmentem krystalizującym lub fragmentem Fc. Większość wtórnych właściwości biologicznych immunoglobulin zależy od sekwencji w regionie Fc. Również jest to region rozpoznawany przez receptory Fc na wielu typach komórek.
2. Pepsyna enzymatyczna:
Pepsyna enzymatyczna rozszczepia immunoglobulinę po stronie końca karboksylowego regionu zawiasowego, tworząc jeden duży fragment o nazwie F (ab ') 2 . F (ab ') 2 ma dwa fragmenty Fab połączone wiązaniami dwusiarczkowymi. Region Fc jest w znacznym stopniu zdegradowany przez pepsynę i zazwyczaj żaden nietknięty fragment Fc pozostaje po trawieniu pepsyną.
