Zasada działania mikroskopu fluorescencyjnego (z rysunkiem)

Przeczytaj ten artykuł, aby poznać działanie mikroskopu fluorescencyjnego!

Zasada działania:

Wiele substancji pochłania światło. Jednak niektóre z nich, po pochłonięciu światła o określonej długości fali i energii, emitują światło o dłuższej długości fali i mniejszej energii.

Takie substancje nazywane są "substancjami fluorescencyjnymi".

Zastosowanie tego zjawiska jest podstawą mikroskopu fluorescencyjnego. W praktyce drobnoustroje są barwione barwnikiem fluorescencyjnym, a następnie oświetlane niebieskim światłem. Barwnik absorbuje niebieskie światło (krótsza długość fali) i emituje zielone światło (dłuższa długość fali).

W mikroskopie fluorescencyjnym jako źródło światła wykorzystywana jest lampa łukowa rtęci o wysokiej intensywności (rysunek 4.11). Emituje białe światło, które przechodzi przez "filtr wzbudnicy". Pozwala tylko na niebieską składową białego światła (białe światło składa się z siedmiu kolorów, które w porządku malejącym długości fali to fioletowy, indygo, niebieski, zielony, żółty, pomarańczowy i czerwony), aby przejść przez niego i blokuje wszystkie inne składniki kolorystyczne.

Lustro dichroiczne, które odbija niebieskie światło, ale pozwala na zielone światło na ścieżce niebieskiego światła. Lustro jest zamocowane pod takim kątem, że niebieskie światło odbija się w dół od próbki.

Próbka jest wcześniej barwiona barwnikiem fluorescencyjnym, takim jak akrydynowy pomarańczowy NO, żółć akrydynowa, akryflawina, tioflawina S, tioflawina T lub tytanowa żółć G. Pewne części próbki zachowują barwnik, podczas gdy inne nie. Części, które zachowują fluorescencyjny barwnik, pochłaniają niebieskie światło i emitują zielone światło. Emitowane zielone światło przechodzi w górę i przechodzi przez dichroiczne lustro. Odzwierciedla niebieskie światło, jeśli w ogóle, i przepuszcza tylko zielone światło.

Następnie światło dociera do "filtra barierowego". Pozwala to zielonemu światłu przejść do oka i blokuje wszelkie pozostałości niebieskiego światła z próbki, które mogło nie zostać całkowicie odbite przez lustro dichroiczne.

W ten sposób oko postrzega poplamione części próbki jako jarzący się zielony obiekt na czarnym tle, podczas gdy nie wybarwione części próbki pozostają niewidoczne.