Immunofluorescencja stosowana do wykrywania antygenów w komórkach
Immunofluorescencja stosowana do wykrywania antygenów w komórkach!
Związki fluorescencyjne jako immunochemiczne do wykrywania antygenów w tkankach zostały wprowadzone przez Coonsa (1941).
Immunofluorescencję stosuje się do wykrywania antygenów w komórkach lub tkankach (przy użyciu znanych przeciwciał), jak również do wykrywania przeciwciał w surowicy (przy użyciu znanych antygenów). Fluorescencja to emisja światła o jednym kolorze, gdy substancja jest wystawiona na działanie światła o innym kolorze. Gdy substancja fluorescencyjna jest wzbudzana światłem o określonej długości fali, pochłania światło i emituje światło o innej długości fali.
ja. Izotiocyjanian fluoresceiny (FITC) ma maksimum absorbancji światła przy 490-495 nm i emituje światło przy 530 nm (kolor zielony).
ii. Izotiocyjanian tetrametylo-rodaminy ma maksimum absorbancji światła przy 550 nm i emituje światło koloru czerwonego (580 nm).
za. Bezpośrednia immunofluorescencja:
Ta technika służy do wykrywania antygenów w komórkach lub tkankach.
Tkanka, która ma nieznany antygen, jest przymocowana do szkiełka.
↓
Znana surowica odpornościowa (specyficzna dla danego antygenu) sprzężona z FIT (znana jako koniugat) jest nakładana na tkankę i inkubowana.
ja. Jeśli antygen będący przedmiotem zainteresowania znajduje się w tkankach, koniugat wiąże się z antygenem.
↓
Następnie szkiełko myje się w celu usunięcia niezwiązanego koniugatu.
↓
Slajd jest następnie oglądany pod mikroskopem fluorescencyjnym.
ja. Jasnozielony kolor będzie widoczny, jeśli w tkance znajduje się antygen.
ii. Jeśli w tkance nie ma antygenu, cały koniugat zostałby przemyty podczas etapu prania i w konsekwencji nie ma zielonego koloru.
Technika ta jest również stosowana do wykrywania obecności bakteryjnych lub wirusowych antygenów w zainfekowanych tkankach.
b. Pośrednia immunofluorescencja:
Ta technika służy do wykrywania przeciwciał w surowicy.
Komórki zawierające znane antygeny są przymocowane do szkiełka.
↓
Surowicę testową dodano na szkiełku i inkubowano.
ja. Jeśli w surowicy znajdują się przeciwciała (przeciwko antygenom w komórkach), przeciwciała będą wiązać się z antygenami w komórkach.
↓
Następnie szkiełko myje się w celu usunięcia niezwiązanych składników surowicy.
↓
Dodano immunoglobulinę anty-ludzką skoniugowaną z FITC i inkubowano.
ja. Sprzężona z FITC immunoglobulina antyludzka będzie wiązać się z przeciwciałami surowicy związanymi z antygenami komórkowymi.
↓
Po przemyciu szkiełko ogląda się pod mikroskopem fluorescencyjnym.
ja. Obecność jasnozielonego koloru wskazuje, że surowica ma przeciwciała przeciwko antygenom w komórkach.
ii. Brak zielonego koloru wskazuje na brak przeciwciał w surowicy przeciwko antygenom w użytych komórkach.
