2 Metody elektroimmunodiffusion Techniki dla antygenu i przeciwciała

W technikach immunodyfuzji antygen i przeciwciało mogą dyfundować, tworząc linię precypitacyjną, co zajmuje dłuższy czas (24-72 godziny).

Jeśli ruch antygenu i / lub przeciwciała zostanie dokonany szybciej, linia precypityny uformuje się w bardzo krótkim czasie, tak, że diagnoza może być szybko wykonana. Cel ten osiąga się, przesuwając elektrycznie antygen i przeciwciało. Istnieje wiele odmian tej zasady. Dwie powszechnie stosowane metody to immunoelektroforeza przeciwprądowa i elektroforeza rakietowa Laurell'a.

Przeciwprądowa immunoelektroforeza (jednowymiarowa podwójna elektroimmunodiffusion):

Dwie płytki są wycinane w agarze na szkiełku.

↓

Jedna studzienka jest wypełniona antygenem, a druga studzienka jest wypełniona przeciwciałem.

↓

Strona przeciwna agaru jest połączona z anodą, a strona antygenowa jest połączona z katodą aparatu do elektroforezy.

↓

Po podaniu elektryczności cząsteczki antygenu i przeciwciała przemieszczają się (z powodu ich ładunków elektrycznych) na agarze pod wpływem elektryczności.

W buforze alkalicznym większość klinicznie ważnych antygenów jest elektroujemnych, a zatem przemieszczają się w kierunku anody (tj. W kierunku dołka przeciwciał). Cząsteczki przeciwciał są neutralne elektrycznie lub słabo ujemne. Normalnie elektrycznie ujemne cząsteczki przeciwciał powinny poruszać się w kierunku anody.

Ale ruch jonów hydroneum w agarze podczas elektroforezy jest bardzo silny i przyciąga słabo ujemne cząsteczki przeciwciała w kierunku katody (tj. W kierunku dołka antygenu). Ponieważ cząsteczki antygenu i przeciwciała poruszają się w przeciwnych kierunkach, spotykają się i tworzą linię precypitacyjną pomiędzy dwoma studzienkami. Linia precypitacyjna jest widoczna po 30 minutach (w przeciwieństwie do 24 godzin w dyfuzji) i jest około 10 razy bardziej czuła niż dyfuzja.

Do detekcji wykorzystuje się immunoelektroforezę przeciwprądową

za. Antygeny meningokokowe, kryptokokowe i hemofilne w płynie mózgowo-rdzeniowym i

b. Antygen powierzchniowy wirusa zapalenia wątroby typu B w surowicy.

Elektroforeza rakietowa Lauren (jednowymiarowa pojedyncza elektroimmunodiffusion):

Ta technika służy do ilościowego oznaczania antygenów. Przeciwciało miesza się ze stopionym agarem i wylewa na szkiełko. Po zestaleniu, studzienki są cięte i wypełniane różnymi stężeniami antygenu.

↓

Po nałożeniu elektryczności antygen jest kierowany do przeciwciał zawierających agar. Linie precytyny powstają wzdłuż bocznych brzegów ruchomej granicy antygenu. Stopniowo antygen jest tracony przez strącanie, tak że jego stężenie na krawędzi natarcia zmniejsza się, a boczne marginesy zbiegają się, tworząc ostry punkt. Tak więc wypadkowy wzór opadów przypomina kolec lub rakietę.

Odległość ostrza od studni antygenu wzrasta wraz ze wzrostem stężenia antygenu. Standardową krzywą można ustalić przy użyciu znanych stężeń antygenów. Stężenie badanego antygenu można określić przez interpolację krzywej standardowej z odległością utworzonej rakiety.

Czułość tej techniki wynosi około 0, 5 mg / ml. Technika Laurell służy również do wykrywania antygenów kryptokoków, meningokoków i hemofilii w płynie mózgowo-rdzeniowym (CSF).