2 Typ elektroforezy Metody białek surowicy (z rysunkiem)

Surowica ma wiele białek. W 1937 r. Arne W Tiselius wprowadził metodę oddzielania różnych białek w polu elektrycznym.

W elektroforezie białka są rozdzielane w polu elektrycznym. Później opracowano elektroforezę strefową w papierze lub octanie celulozy. W 1952 r. Opracowano dwuetapową metodę łączącą elektroforezę z immunodyfuzją. Następnie C Williams, P Graber i M Poulik wprowadzili klasyczną metodę immunoelektroforezy (w której zarówno elektroforeza, jak i podwójna immunodyfuzja są wykonywane na tym samym szkiełku powlekanym agarem).

1. Strefowa elektroforeza:

Białka można rozdzielać na podstawie ich powierzchniowych ładunków elektrycznych. Do separacji stosuje się obojętny nośnik, taki jak papier, octan celulozy lub agar. Próbkę surowicy umieszcza się na podłożu nośnym. Medium nośne jest następnie połączone z dodatnimi i ujemnymi biegunami aparatu do elektroforezy. Pod wpływem pola elektrycznego białka są ładowane i przemieszczają się po środku nośnym. Ich ruch zależy od ich ładunku elektrycznego.

Ponieważ różne cząsteczki białka mają różne ładunki, przemieszczają się do różnych pozycji w medium nośnym. Zwykle elektroforezę prowadzi się przez 60-120 minut lub dłużej. Następnie białka są barwione i badane wizualnie lub skanowane w densytometrze. Skanowanie densytometryczne oddzielonych i zabarwionych frakcji białkowych przekształca każde pasmo we wzór na jego charakterystyczny pik i pomaga w oznaczeniu ilościowym każdej frakcji białkowej.

2. Elektroforeza białek surowicy:

Normalną ludzką surowicę dzieli się na pięć głównych pasm elektroforetycznych: albumina, α1-globulin, α2-globulin, β-globulina i y-globulina (ryc. 27.5).

Elektroforeza strefowa jest przydatna w diagnostyce niektórych chorób człowieka:

Rys. 27.5A do C:

Elektroforeza na taśmie acetylocelulozowej i skanowaniu densytometrycznym paska papieru octanowego z celulozy: A i A1: Normalne pasma białek surowicy na pasie octanu komórkowego uwidocznione po barwieniu (A) i skanowaniu densytometrycznym z paska octanu celulozy (A1).

B i B1: Hipergammaglobulinemia

C i C1: Hipogammaglobulinemia

ja. Szpiczak mnogi i makro-globulinemia Waldenstroma. W tych chorobach w regionie γ-globuliny występuje zwykle elektroforetycznie ograniczony wypustek białkowych. Kolec stanowi akumulację monoklonalnej immunoglobuliny. Monoklonalne immunoglobuliny mają zdefiniowany ładunek powierzchniowy, a zatem wytwarza się kolec (podczas gdy normalny wzór immunoglobulin poliklonalnych powoduje rozmaz w regionie y-globuliny).

ii. Hipogammaglobulinemia (znaczne zmniejszenie stężenia globuliny gamma w surowicy).

iii. Hipoproteinemia (znaczne zmniejszenie wszystkich białek surowicy).

iv. Hipoalbuminemia:

Ograniczenie albumin, które występują w wielu chorobach wątroby i nerek.

v. Elektroforeza moczu pomaga w wykrywaniu wolnych łańcuchów lekkich immunoglobulin, takich jak białko Bence-Jones.

vi. Strefowa elektroforeza płynu mózgowo-rdzeniowego (CSF) pomaga w rozpoznaniu stwardnienia rozsianego i innych zaburzeń ośrodkowego układu nerwowego. Elektroforeza białek w surowicy jest uważana za test przesiewowy do wykrywania nieprawidłowości białek. Konieczna jest dalsza analiza, aby znaleźć konkretne nieprawidłowości.