Kliniczna adekwatność testu Coomb'a (test antyglobulinowy)
Test Coombsa to prosta i genialna technika. Test Coombsa został po raz pierwszy opisany w 1908 r. Przez Moreschiego, a następnie został ponownie odkryty przez RR Coombsa i współpracowników w 1945 r. W celu zademonstrowania nieaglutynujących przeciwciał przeciwko antygenom czerwonych krwinek.
(Przeciwciała są nazywane przeciwciałami "nie aglutynującymi", ponieważ przeciwciała nie mogły wywoływać aglutynacji, pomimo ich wiązania z antygenami na RBC .. Przeciwciała są czasami określane jako "niekompletne przeciwciała", ponieważ przeciwciała nie powodują aglutynacja, ale nie ma niekompletności w strukturze cząsteczki przeciwciała).
Przeciwciała nie powodujące aglutynacji w rzeczywistości wiążą się z antygenami na powierzchni erytrocytów. Ale oczekiwana aglutynacja RBC nie występuje. Po dodaniu innego przeciwciała (zwanego anty-przeciwciałem lub antyglobuliną) przeciwko przeciwciału związanemu z RBC zachodzi aglutynacja. Przeciwciała wiążą się z regionami Fc przeciwciał związanych z RBC i tworzą siatkę, która prowadzi do aglutynacji. Test nazywa się testem antyglobulinowym lub testem Coombsa.
Istnieją dwa rodzaje testów antyglobulinowych:
1. Bezpośredni test antyglobulinowy (DAT)
2. Pośredni test antyglobulinowy (LAT)
1. Bezpośredni test antyglobulinowy (DAT) służy do wykrywania przeciwciała, które jest związane z RBC in vivo.
Wyprane RBC od pacjenta są zmieszane z antyglobuliną.
↓
Antyglobuliny wiążą się z nieaglglutynującymi przeciwciałami na powierzchni RBC i powodują widoczną aglutynację. Wynik testu jest pozytywny dla DAT (rys. 16.6).
Zatem dodatni DAT sugeruje, że RBC pacjenta są powlekane przeciwciałami niezawierającymi aglutynacji, a pacjent jest uważany za DAT-dodatni.
ja. Dodatnie DAT występuje z RBC noworodków z chorobą hemolityczną noworodków (RBC z HDN są pokryte przeciwciałami anty-Rh).
ii. Obecnie DAT stosuje się do wykrywania przeciwciał IgG i C3b związanych z powierzchnią krwinek czerwonych. U pacjentów, u których występuje hemoliza, test DAT jest przydatny do ustalenia, czy hemoliza ma etiologię odpornościową, czy nie.
Ryc. 16.6: Bezpośrednie badanie aglutynacyjne Coomb (DAT).
DAT stosuje się do wykrywania obecności nieaglutynujących przeciwciał związanych na powierzchni RBC. A. Przemyte osobniki RBC miesza się z odczynnikiem antyglobulinowym. Anty-globuliny wiążą się z regionami Fc przeciwciał związanych z RBC i powodują widoczną aglutynację, a osobnik jest uważany za DAT-dodatni. B. Jeśli RBC nie są pokryte przeciwciałami, nie będzie aglutynacji, a osobnik jest uważany za negatywny pod względem DAT. DAT stosuje się również do wykrywania obecności noworodków pokrytych przeciwciałami anty-Rh, u noworodków podejrzewanych o chorobę hemolityczną noworodków.
ja. Nieimmunologiczne przyczyny hemolizy [takie jak rozsianego wykrzepiania wewnątrznaczyniowego, niedobór enzymów czerwonych krwinek [takich jak niedobór dehydrogenazy glukozo-6-fosforanowej (niedobór G6PD), defekty błony komórkowej (takie jak dziedziczna sferocytoza, PNH) i hemoglobinopatie (takie jak anemia sierpowata, talasemia)] są negatywne DAT.
ii. Immunologiczne przyczyny hemolizy (takie jak autoimmunologiczna niedokrwistość hemolityczna, hemoliza indukowana lekami, hemolityczne reakcje transfuzji) są DAT-pozytywne.
iii. Dodatni DAT spowodowany samym C3 stwierdza się u pacjentów z zimnymi autoprzeciwciałami, napadową zimną hemoglobinomoczem, aw niektórych przypadkach niedokrwistością hemolityczną indukowaną przez leki.
2. Pośredni test aglutynacji (IAT) służy do wykrywania obecności niezwiązanych przeciwciał przeciwko RBC w surowicy pacjenta.
ja. IAT do wykrywania przeciwciał anty-Rh w surowicy matki:
Surowicę matki inkubuje się z krwinkami RBC z dodatnimi grupami krwi O. Jeśli przeciwciała anty-Rh są obecne w surowicy matki, przeciwciała będą wiązały się z RBC. RBC są następnie myte.
↓
Następnie dodano odczynnik antyglobulinowy.
↓
Jeśli przeciwciała anty-Rh są obecne w surowicy matki, RBC będą aglutynowane, a test będzie dodatni dla IAT.
ii. IAT do wykrywania przeciwciał w surowicy biorcy przeciwko RBC w dawcy podczas transfuzji krwi:
Test IAT jest szeroko stosowany (przed transfuzją krwi) w krzyżowym dopasowywaniu RBC dawcy z surowicą biorcy w celu wykrycia obecności przeciwciał u biorcy, który może reagować z RBC dawcy.
Przemyć RBC dawcy.
↓
Dodaj surowicę biorcy do RBC i inkubuj w 37 ° C przez 30 minut.
↓
Umyj RBC.
↓
Dodaj odczynnik antyglobulinowy.
Rozwój aglutynacji wskazuje, że surowica biorcy ma przeciwciała przeciwko RBC-ów-dawców, a test jest podawany jako pozytywny dla przeciwciał. Dodatni wynik IAT wskazuje, że proponowana krew dawcy nie powinna być transfuzowana do danego biorcy.
Obecny preparat do oznaczania antyglobuliny (zwany także odczynnikiem Coombsa) zawiera "koktajl" przeciwciał monoklonalnych skierowanych przeciwko ludzkim IgG i C3b (Wiązanie niezaglutynujących przeciwciał z RBC aktywuje układ dopełniacza powodując odkładanie fragmentów C3b w RBC, a zatem oprócz przeciwciał, RBC są również pokryte fragmentami C3b).
