Kliniczne zastosowania cytometru przepływowego
Kliniczne zastosowania cytometru przepływowego!
1. Wyliczenie różnych komórek (takich jak komórki T i komórki B).
2. Wykrywanie antygenów komórek B i klasyfikacja złośliwości krwiotwórczej (białaczki i chłoniaki).
3. Wykrywanie antygenów na powierzchni komórek szpikowych, które jest użyteczne w diagnostyce zespołów mielodysplastycznych i białaczki szpikowej.
4. Cząsteczki CD34 ulegają ekspresji na powierzchni hematopoetycznych komórek macierzystych i progenitorowych. Komórki macierzyste wyizolowane ze szpiku kostnego lub krwi obwodowej są wyliczane przy użyciu znakowanych mAb wobec CD34, tak, że dokładna liczba komórek macierzystych może być obliczona i przetoczona pacjentowi. Pozostałe komórki macierzyste są przechowywane w ciekłym azocie i mogą być później transfuzowane do tego samego pacjenta, w razie potrzeby.
5. Fenotypowanie HLA Przeciwciała znakowane fluorkiem chromu dla każdego antygenu HLA stosuje się do wiązania z antygenami MHC klasy I i klasy II na powierzchni komórek. Kolorowe komórki są następnie analizowane (jako komórki przechodzące jako pojedyncza kolumna) w cytometrze przepływowym.
6. Wykrywanie antygenów wewnątrzkomórkowych
Komórki są najpierw traktowane środkami, które sprawiają, że komórka jest przepuszczalna, bez całkowitego rozbicia komórki.
↓
Następnie komórki traktuje się łagodnymi środkami konserwującymi, aby usieciować białka cytoplazmatyczne w miejscu i zapobiegać ich wyciekowi z komórki.
↓
Następnie komórki traktuje się znakowanymi mAb skierowanymi przeciwko antygenom wewnątrzkomórkowym. Znakowane mAb wchodzą do komórek i wiążą się z wewnątrzkomórkowymi antygenami.
↓
Komórki przepuszcza się przez cytometr przepływowy w celu oceny wybarwionych komórek.
ja. Wykrywanie wewnątrzkomórkowej terminalnej transferazy dezoksynukleotydowej (TdT) pomaga zdefiniować wczesne nowotwory z komórek B. TdT jest enzymem wyrażanym podczas przegrupowania genu immunoglobulin odpowiedzialnego za dodanie losowych nukleotydów na połączeniach segmentów immunoglobulin. Stąd ekspresja TdT w złośliwej populacji komórek B wskazuje na bardzo niedojrzały fenotyp komórek B.
ii. Wykrywanie wewnątrzkomórkowej mieloperoksydazy pomaga w klasyfikacji różnych podtypów białaczki szpikowej.
7. Analiza zawartości DNA w komórkach. Cytometr przepływowy może ocenić ilość materiału genetycznego w komórce i określić frakcję fazy S lub ilość aneuploidii w populacji komórek, a. Ploidia DNA Normalne komórki zawierające dwie kopie chromosomu nazywane są komórkami diploidalnymi.
Wszystkie komórki (z wyjątkiem komórki jajowej i plemników), które nie są diploidalne, są uważane za aneuploidalne i mogą służyć jako wiarygodny wskaźnik nowotworów. Duża liczba komórek w guzie ma nieprawidłową ilość DNA. Analizę cytometrii przepływowej przeprowadza się przez inkubację permeabilizowanych komórek z barwnikami fluorescencyjnymi (takimi jak jodek propidyny).
Barwnik przenika do DNA i fluoryzuje. Ilość fluorescencji jest wprost proporcjonalna do zawartości DNA w komórce. Skuteczność chemioterapii pod kątem złośliwości u pacjenta można ocenić za pomocą analizy ploidalnej. Analiza ploidalna określa całkowitą ilość jądrowego DNA w poszczególnych komórkach nowotworowych. Indeks DNA to stosunek fluorescencji DNA komórki nowotworowej do fluorescencji DNA w normalnych komórkach. Indeks DNA prawidłowej komórki diploidalnej wynosi 1. Indeks DNA większy lub mniejszy niż 1 wskazuje na guza aneuploidalnego.
b. Analiza cyklu komórkowego DNA:
Zawartość DNA w komórkach w różnych fazach cyklu komórkowego podczas replikacji (tj. Fazę syntezy fazy Gq / Gj, synteza DNA fazy S, faza syntezy fazy G2 / M po syntezie DNA) można zmierzyć w celu oceny wzrostu komórek i agresywność nowotworów. Więcej DNA jest syntetyzowane przez agresywne komórki nowotworowe. Komórki przechodzące przez fazę S wykazują syntezę DNA, która jest wprost proporcjonalna do ich agresywności.
8. Wiele testów czynnościowych leukocytów można wykonać za pomocą cytometru przepływowego.
ja. Wytwarzanie O 2 - (ponadtlenku) jako testu na przewlekłą chorobę ziarniniakową.
9. Wykrywanie żywotności komórek:
Jodek propidium barwnika wchodzi do komórek, które mają pęknięte membrany i zaburzoną strukturę jądrową. Dlatego w przypadku jodku propidyny martwe komórki będą się fluoryzowały, podczas gdy żywe komórki nie fluoryzują. Ponadto fluorescencja jodku propidyny znajduje się w daleko czerwonej części widma. Dlatego też tę metodę można łączyć z regularnym barwieniem mAb, przy czym martwe komórki są zabarwione na czerwono, a zatem można je pominąć w analizie danych.
10. Dostępne są również metody cytometrii przepływowej do wykrywania komórek przechodzących apoptozę.
