Techniki immunohistochemiczne do wykrywania antygenów nowotworowych

Testy immunohistochemiczne są szeroko stosowane do wykrywania antygenów nowotworowych i do klasyfikowania typów komórek limfocytów w sekcjach chirurgicznej patologii.

Próbkę tkanki mocuje się na szkiełku.

↓

MAb znakowane enzymem (koniugat) nakłada się na próbkę i inkubuje.

ja. Jeżeli próbka ma swoisty antygen przeciwko mAb, koniugat wiąże się z antygenem na próbce.

↓

Po przemyciu dodaje się substrat i inkubuje.

ja. Rozwój koloru oznacza, że ​​specyficzny antygen przeciwko mAb jest obecny w sekcji tkanki.

ii. W przypadku braku specyficznego antygenu nie ma rozwoju barwy.

↓

Płytka jest myta, a pod mikroskopem widać część tkanki pod kątem obecności koloru.

Peroksydaza chrzanowa (HRP) to enzym powszechnie stosowany w technikach immunohistochemicznych. Substratem dla HRP jest nadtlenek wodoru i diamino-benzydyna. Reakcja HRP z diaminobenzydyną daje czarny kolor.

Antipotoksydaza peroksydazowa (PAP) to inna metoda stosowana w patologii chirurgicznej do wykrywania enzymów i antygenów związanych z nowotworami.

Jest to metoda trzyetapowa:

Krok 1:

Tkanka podejrzewana o określony antygen jest przymocowana do szkiełka.

↓

Znane przeciwciało królika przeciwko omawianemu antygenowi upuszcza się na tkankę (podejrzewaną o antygen) utrwaloną na szkiełku.

ja. Jeśli odpowiadający antygen znajduje się w tkance, wiąże się z nim przeciwciało. Preparat ślizga się po inkubacji.

↓

Krok 2:

Immunoglobulina anty-króliczą (nazywana przeciwciałem łączącym) jest upuszczana na szkiełko.

ja. Jeśli pierwsze przeciwciało królika znajdzie się w szkiełku (związanym z antygenem), immunoglobulina przeciw-króliczą wiąże się z króliczym przeciwciałem. Po inkubacji szkiełko myje się.

↓

Kroki 3:

Zrzucono kompleks immunologiczny, składający się z króliczych przeciwciał przeciwko peroksydazie, w połączeniu z peroksydazą. To królicze przeciwciało będzie wiązało się z immunoglobiną anty-króliczą (etap 2 przeciwciała) poprzez jej region Fc. Po inkubacji szkiełko myje się.

↓

Na koniec dodaje się substrat peroksydazy. Substrat będzie reagował z peroksydazą, co powoduje powstawanie barwnego produktu, który jest widoczny pod mikroskopem.

ja. Obecność zabarwionego produktu na tkance wskazuje na obecność odpowiedniego antygenu.

ii. Brak barwnego produktu na szkiełku wskazuje, że dany antygen jest nieobecny w tkance.